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        ONPG试验(β-半乳糖苷酶试验)探讨

        浏览次数: 日期:2017年3月13日 14:55

        最近经常有人提出疑问:1.为什么ONPG试验可以用来区分乳糖迟缓发酵?2.为什么国标上写明需要使用3%氯化钠三糖铁(或三糖铁)上隔夜培养物进行ONPG试验?3.副溶血性弧菌,进行OPNG试验时,按照标准为何要滴加甲苯,其作用是?

        我司查阅许多资料,汇总了一下,下面与大家分享:   

        原理:ONPG中文名称为邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷。ONPG可被β-半乳糖苷酶水解为半乳糖和黄色的邻-硝基苯酚(ONP),因此可以通过培养液颜色的变化测知β-半乳糖苷酶的活性。

        乳糖是大多数微生物需要检测的一种糖,它代谢需要两种酶,一种是细胞通透酶,乳糖在渗透酶作用下进入细胞;一种是β-半乳糖苷酶,水解乳糖成半乳糖和葡萄糖。β-半乳糖苷酶也可以直接作用于ONPG,使之水解成为半乳糖和黄色的邻-硝基苯酚(ONP),这个作用不需要经过细胞通透酶作用进入细胞内,所以是快速的,在24h内可以完成的,甚至是乳糖迟缓发酵菌也是如此。因此解释了试验中自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种于36℃培养1-3h24h观察结果。如果β-半乳糖苷酶产生,则于1-3h变黄,如无此酶则24h不变色。

        根据上述两种酶,可以将微生物分为以下几种:

        1发酵乳糖(以18-24小时)菌,具有通透酶和β-半乳糖苷酶P + G +

        2 Delayed lactose fermenters (taking longer than 24 hours) lacking permease but possessing galactosidase: P- G+.

        2延迟发酵乳糖(以不超过24小时)菌,缺乏通透酶但具有半乳糖苷酶P- G +

        3 Non-lactose fermenters lacking both permease and galactosidase: P- G-.

        3发酵乳糖的菌,缺乏通透酶和β-半乳糖苷酶P- G-

        ONPG试验可用于—从非发酵乳糖菌(P- G-)中,区分迟缓发酵乳糖的菌(P- G +),如:

        1 Differentiate late lactose fermenters (P- G+) from non-lactose fermenters (P- G-).

         (a) Citrobacter (+) and Salmonella arizonae (+) from Salmonella (-).

        a)亚利桑那沙门菌(G+)从沙门氏菌(G-)。

        (b) Escherichia coli (+) from Shigella sonnei (-).

        b)大肠杆菌(G+)从宋内氏志贺菌(G-)。

        为何试验时使用3%氯化钠三糖铁(三糖铁)上隔夜培养物进行ONPG试验?我司查阅很多资料,但都没有明确说明,只有FDA网站上,有写明“Inoculate cultures to be tested onto triple sugar iron agar slants and incubate for 18 h at 37°C (or other appropriate temperature, if required). Nutrient (or other) agar slants containing 1.0% lactose may also be used.”意思是:测试菌接种到三糖铁培养基上,3718h培养。营养琼脂斜面(或者其他)含1%乳糖的培养基,也可以。因此,推断三糖铁培养基中含有乳糖,细菌经过隔夜生长,已经产生了活性良好的β-半乳糖苷酶,使用这样的菌,可以使ONPG更快的被β-半乳糖苷酶分解,试验现象更快,更好的显现。此外,滴加甲苯以及水浴5min,都是为了使β-半乳糖苷酶充分的释放出来。

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        所属类别: 微生物技术资料

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